總氮是各種無機態(tài)氮（硝酸鹽氮、亞硝酸鹽氮、氨氮）和有機態(tài)氮（蛋白質(zhì)、氨基酸、有機胺）的總量，它是衡量水質(zhì)的重要指標(biāo)。

目前，比較常用的總氮檢驗方法是堿性過硫酸鉀消解紫外分光光度法(HJ636－2012)。

但很多人反應(yīng)該方法不好做，其中代表性問題有:

· 氨氮高于總氮的測定結(jié)果；

· 空白的校正吸光度太高，大于0.030。

01空白吸光值過高

 空白值偏高是影響總氮測定準(zhǔn)確度的主要因素，HJ636－2012要求空白實驗的校正吸光度A（A=A220－2A275）＜0.030。

在總氮測定中，實驗空白值常與玻璃器皿的潔凈度、實驗用水、過硫酸鉀試劑純度、堿性過硫酸鉀溶液的溫度與保存時間等因素密切相關(guān)。

相關(guān)研究顯示，常規(guī)氮玻璃器皿的洗滌標(biāo)準(zhǔn)無法滿足實際需要。

因此，用于總氮測定的器皿在常規(guī)洗凈后，還需在鹽酸溶液（1體積鹽酸倒入9體積水）中浸泡24h，然后再用無氨水進(jìn)行涮洗。

如下表實驗結(jié)果所示，實驗所用玻璃器皿在去污粉清洗的條件下空白吸光度均大于標(biāo)準(zhǔn)要求的0.030，此時應(yīng)檢查器皿的污染狀況。

玻璃器皿不同洗滌方法下空白樣平行值

而在對照實驗中，用去污粉清洗后再用鹽酸浸泡24h，空白吸光度完全符合HJ 636—2012 的質(zhì)控要求。

綜上所述，為防止總氮測定準(zhǔn)確度出現(xiàn)偏差，建議每次測定后，所有的玻璃器皿在清洗干凈后，直接浸泡到鹽酸溶液中。每次使用前，最好再用新鮮制備的超純水沖洗數(shù)次并立即使用。

2、實驗用水對測定結(jié)果對影響

雖然HJ636—2012對實驗用水明確要求為“無氨水”，但在相同實驗條件下，超純水的空白值最小，且超純水機是多數(shù)實驗室的常規(guī)設(shè)備，方便做到現(xiàn)用現(xiàn)制備。

如下表所示，用超純水和無氨水測定的空白值比去離子水小，超純水的空白值最小，三者均滿足總氮測定要求。

不同實驗用水的空白值

從實際經(jīng)驗來看，空白值越低，對總氮測定準(zhǔn)確度越有利，尤其是測試總氮含量較低的樣品。因此，建議有條件的實驗室使用超純水。

3、過硫酸鉀試劑純度對測定結(jié)果的影響

HJ636—2012要求過硫酸鉀試劑的含氮量應(yīng)不超過0.0005%，但不同廠家、不同批次生產(chǎn)的過硫酸鉀質(zhì)量存在差異。

對于一些純度不高的過硫酸鉀可以進(jìn)行提純以達(dá)到HJ636—2012質(zhì)控要求。

但由于實驗室條件限制以及過硫酸鉀對50 ℃以上溫度的不穩(wěn)定性，建議優(yōu)先選用合格的國藥集團(tuán)化學(xué)試劑或進(jìn)口過硫酸鉀。

不過從成本角度看，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑相比于進(jìn)口的更加物美價廉，所測數(shù)據(jù)也完全滿足HJ636—2012質(zhì)控要求。

過硫酸鉀純度對空白值對影響

4、過硫酸鉀溫度及貯存對測定結(jié)果的影響

HJ636—2012中堿性過硫酸鉀溶液配制方法：40.0g過硫酸鉀溶于600mL水中，另取15.0g氫氧化鈉溶于300mL水中。待氫氧化鈉溶液溫度冷卻至室溫后，混合兩種溶液定容至10 00mL。

過硫酸鉀常溫下不易完全溶解，為促進(jìn)其溶解往往需要加熱。

需特別注意的是，過硫酸鉀在60℃甚至50℃就會分解，因此在實際工作中加熱溫度最好控制在50℃以內(nèi)。這樣既利于促進(jìn)過硫酸鉀溶解，又可減少高溫對過硫酸鉀氧化能力的損失。

同時，過硫酸鉀和氫氧化鈉最好分別配制，待氫氧化鈉溶液冷卻至室溫后再混合定容。這是由于氫氧化鈉在溶解過程中會放出大量熱而導(dǎo)致配制過程中過硫酸鉀氧化能力的損失。

配制好的堿性過硫酸鉀溶液保存于聚乙烯瓶中，其放置天數(shù)對空白值有重要影響。

相關(guān)研究表明，空白值隨著堿性過硫酸鉀放置時間的延長而逐漸增大，用新配制的堿性過硫酸鉀測得空白值最低。

 

堿性過硫酸鉀放置時間對空白值的影響

如上表所示，7日內(nèi)空白值差別不大，在保存30日后所測得的空白值仍能滿足試驗要求。

因此，配好的堿性過硫酸鉀最好在“7日保鮮期”內(nèi)使用，若保存條件良好，可延長放置時間在30日左右。

5、其他因素對測定結(jié)果的影響

實際工作中還發(fā)現(xiàn)，總氮測定中還有不少因素也會導(dǎo)致結(jié)果準(zhǔn)確度降低，如消解時間及冷卻時間、水樣的酸堿度等。

按HJ636—2012要求，總氮樣品消解需在高壓蒸汽滅菌器中壓力為1.1～1.4kg/cm2，保持溫度在120℃～124℃之間30min。另外有實驗表明，消解完成后延長降溫冷卻時間，待溫度下降到低于50℃再開閥放氣取出比色管冷卻，測定結(jié)果較好。

同樣的，當(dāng)水樣pH值在5～9這個范圍內(nèi)的測定結(jié)果較好，且數(shù)據(jù)波動性較小; 超出此范圍數(shù)據(jù)波動性較大，準(zhǔn)確度降低，且無明顯規(guī)律。

02 總氮含量低于氨氮含量的現(xiàn)象

按道理來說，氨氮包含于無機氮，而無機氮包含于總氮中。但在實際測定中，氨氮>總氮的情況還是很常見的。 對于這種現(xiàn)象來說，一般看法是樣品中氨氮含量較高時，加入堿性過硫酸鉀，在堿性條件下形成氨水，氨水揮發(fā)生成氨氣，從比色管中釋放出來，導(dǎo)致測定的總氮量只包含了部分氨氮，從而低于氨氮含量。

因此，利用堿性過硫酸鉀消解紫外分光光度法處理樣品時，可以在所有樣品都加入過硫酸鉀溶液后，統(tǒng)一加蓋。這樣就給氨氮含量較高的樣品中氨氮以氨氣形式揮發(fā)出來創(chuàng)造了時間。

當(dāng)然，也有操作人員采用雙管消解法。即將樣品加入比色管用無氨水稀釋至10mL后，將堿性過硫酸鉀加入另一小試管中，再將裝有堿性過硫酸鉀的小試管放入比色管中，小試管頂部的高度應(yīng)超出比色管中的試樣液面以避免樣品處于堿性環(huán)境，蓋上比色管蓋后，再進(jìn)行比色管內(nèi)兩種液體的混合。

但雙管法在實際操作過程中過于繁瑣，測試結(jié)果也不是很理想。

其實，針對氨氮>總氮這個問題應(yīng)該如HJ636－2012的征求意見稿所說，“不應(yīng)該僅僅停留在總氮測定本身上，而是應(yīng)該從測定總氮和氨氮兩者之間存在的一些聯(lián)系上查找原因”，“在不斷完善總氮測定的過程中，還應(yīng)同步完善氨氮測定中包括實驗用水、器皿、試劑和實驗環(huán)境，使兩者同步遠(yuǎn)離氮的污染，才能保證測定結(jié)果的正確性?！?/span>

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